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Pyrosequencing #
정의 #
Pyrosequencing은 합성에 의한 시퀀싱을 기반으로 한 DNA시퀀싱의 방법 중 하나이다. 피로인산이 발생하기 때문에 Pyro- 라는 이름이 붙었다. 1세대 시퀀싱 기법인 Sanger 법과 비교하여 혁신적인 방법이라 하여 차세대 시퀀싱(NGS, Next-generation sequencing 기법 이라 불리기도 한다.
개요 #
1. DNA 중합 즉, 염기가 하나 추가될 때 마다 피로인산(Pyrophosphate)이 방출된다.
2. 피로인산은 황산 아데니릴 전이효소(Sulfate adenylyltransferase, ATP sulfurylase)에 의해 ATP를 생성하고 분해된다.
3. 생성된 ATP는 루시퍼라아제(Luciferase)에 의해 빛 에너지로 전환된다.
4. 어떤 염기를 투입했을 때 빛이 나오는가를 측정하여 주형 DNA의 서열을 결정할 수 있다.
만약 동일한 염기가 중복되어 나타날 경우, 더 많은 피로인산이 발생하고, 더 많은 ATP가 발생하므로 더 강한 빛이 발생된다.빛의 강도를 측정하여 서로 비교하는 것으로 염기가 얼마나 중복되었는가를 알 수 있다.
참조 #
https://youtu.be/UganL_z_m5E (출처 : youtube)
