Colony PCR #

세균의 DNA를 extraction 하지 않고, colony의 일부를 Loop % Needle 혹은 멸균된 날카로운 것으로 찍어 바로 튜브에 넣고 PCR반응 시키는 것을 말한다. E.coli나 그 밖에 그람 음성 세균처럼 고온처리로만으로도 세포벽이 쉽게 깨지는 경우에는 이 방법이 시간이나 경제적인 면에서 유리하다.

실험 방법 #

1. 세균의 colony 일부를 Loop % Needle 혹은 멸균된 날카로운 것으로 찍어 바로 튜브에 넣는다.
2. DW, 10XBuffer, dNTP, Primer 27F, Primer 1492R, ExTaq을 순서대로 넣어 Mixture를 만든다.
3. Colony가 들어 있는 튜브에 mixture를 넣어 준다.
4. PCR Cycles를 돌린다 (Denat, Anneal, Ext, Finish).
5. PCR product가 생산되면 gel을 내려 결과를 확인한 후, 시퀀싱 업체에 보내 염기서열을 확인한다.