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Blotting #
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Category
Biology

Blotting, 블로팅, 블롯팅 #

DNA, RNA 혹은 단백질을 영동한 후 막을 올려 막에 영동한 결과를 그대로 옮기는 실험 방법을 말합니다. 영동 결과가 막에 그대로 옮겨지고 고정이 되어 이후 실험을 통해 특정 DNA, RNA, 단백질의 종류나 발현량을 통해 특성을 알 수 있습니다.

Southern Blot #

DNA 전기영동결과를 막에 옮기는 방법입니다. DNA를 제한효소 이용하여 자르고 난 뒤, 전기를 통해 분자순서대로 영동을 한 뒤 그 결과를 고정하기 위해 막으로 옮깁니다. 방사성 동위원소 표지 탐침을 hybridization한 뒤 막 위의 DNA에 탐침을 붙인 뒤 x-ray필름에 노출시키면 DNA가 붙어있는 부분의 X-ray필름이 타서 현상을 하면 결과가 나오게 됩니다.

출처 : http://www.mun.ca/biology/scarr/Gr12-18.html

Northern Blot #

RNA 영동결과를 막에 옮기는 방법으로 RNA를 크기별로 전기영동을 한 뒤 membrane으로 RNA 전기영동 결과 밴드를 옮깁니다. 영동을 하기 위한 젤을 만들때 RNA의 2차 구조 형성을 방지하기 위하여 포름알데하이드를 첨가합니다. 방사성 동위원소 표지 탐침을 hybridization한 뒤 막 위의 RNA에 탐침을 붙인 뒤 깨끗이 워싱하고 x-ray필름에 노출시키면 RNA가 붙어있는 부분의 X-ray필름이 타서 현상을 하면 결과가 나오게 됩니다.

Western Blot #

단백질 영동결과를 막에 옮기는 방법으로 단백질을 아가로스젤에 전기를 이용하여 크기별로 영통 한 뒤, 밴드확인을 위해서 membrane으로 옮깁니다. 이때 사용되는 membrane종류는 nitrocellulose와 PVDF등이 있습니다. Membrane으로 옮겨진 단백질들을 확인 하는 방법인데 background를 block하기 위해 skimmed milk를 사용하고, antibody를 이용하여 특정한 단백질의 발현이나 발현양을 보는 방법입니다. 1차 Ab를 사용하여 binding하면 2차 Ab가 발광할 수 있도록 1차 Ab에 바인딩합니다. 이 미세한 형광을 X-ray에 감광시켜 비교하는 실험입니다.

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